脱氧核糖核三磷酸发明涉及人工合成脱氧核糖核酸的必备前体原料的制备方法。

基本介绍

申请专利号：CN00100844.7

专利申请日：2000.02.17

名称：脱氧核糖核苷三磷酸的制备方法

公开（公告）号：CN1269422

公开（公告）日：2000.10.11

类别：化学；冶金

颁证日

优先权

申请（专利权）：郭焕芳

地址：102413北京市275信箱92分箱

发明（设计）人：郭焕芳

国际申请：

国际公布：

进入国家日期：

专利代理机构：北京市科技专利事务所

代理人：杜澄心

摘要

本发明涉及人工合成脱氧核糖核酸的必备前体原料的制备方法。本发明采用酶解—酶促—化学合成全新工艺。采用天然DNA经溶液态脱氧核糖核酸酶的酶解可得到DNMP，DNMP收率为70—90%。DNMP在经DNMP酶反应一步后结合化学反应，可分别转化为相应的DNTP，经层析法纯化，以钠盐或钡盐的形式沉淀分离，可以得到纯度为95%—97%的DNTP。本发明不仅使DNTP的生产工艺变的简单，而且使生产量达到了摩尔级，适于工业生产，并且污染性极小。

主权项

权利要求书1．一种脱氧核糖核苷三磷酸的制备方法，包括以下步骤：（1）酶解：DNMP酶制备的培养基的基本组成和含量为5——10%的细菌培养用酵母提取物、0．5—2%的蛋白胨、4—6%的磷酸氢二钾、2—5%的磷酸氢二钾、10—15%的葡萄糖、0.5—3%的尿素、0.2%的氯化钙、0.2%的氯化锌，余量为水溶液；以上培养基经灭菌、接种、收集和萃取直接获得；萃取液不经纯化可直接使用；将商品脱氧核糖核酸分散在水中制得DNA水溶液，在所述DNA溶液中加入锌离子使其浓度达到2×10—2—1×10—4M，根据脱氧核糖核酸酶的活性加入其量，酶解在30—55℃下进行；酶解5—15小时；（2）酶促：DNMP水溶液用10M的氢氧化钾溶液调节PH为4—8，加入磷酸盐，再加入金属离子，用atp作催化剂，根据DNMP酶的活性加入DNMP酶，50—55℃保温48—96小时；（3）化学合成：酶促反应完成后，加入等量的醇类溶剂，2—5倍量的磷酸或磷酸盐，20—40倍量的DCC，80—90℃下反应4—8小时；所得混合液为磷酸盐，DNMP、DNDP、DNTP和多磷化合物；该溶液经过层析分离可得到纯净的DNTP。

外显子松果腺分子杂交

参考资料