过碘酸希夫反应 :显示多糖和糖蛋白的组织化学反应

更新时间:2024-09-21 00:11

过碘酸希夫反应(英文名:periodic acid Schiff reaction),简称PAS或PAS反应,又称糖原染色,是显示糖原的细胞化学方法,该反应适用于细胞和组织中的多糖、黏多糖、黏蛋白等的显示。

碘酸希夫反应的化学原理为:糖原中的1,2-乙二醇基经过碘酸氧化而产生双醛基。醛与希夫染料中的无色品红作用,使无色的亚硫酸品红失去亚硫酸,重新排列,恢复品红对结构,显示紫红色,定位于胞质中糖原所在部位。

在临床方面,过碘酸希夫反应可用于鉴别红血病、红白血病及贫血类型,急性白血病细胞类型及其他细胞类型。此外,过碘酸希夫反应还可应用于糖尿病的诊断及研究和某些肿瘤的诊断及鉴别等方面。

化学原理

高碘酸希夫反应(periodic acid Schiff reaction,PAS)是显示多糖、黏多糖、糖蛋白的组织化学反应,糖被强氧化剂过碘酸氧化后,形成多醛,后者再与无色的品红硫醛配位化合物(即希夫试剂)反应,形成的终产物为紫红色沉淀。

高碘酸希夫反应又称糖原染色。糖原中的1,2-乙二醇基经过碘酸氧化而产生双醛基。醛与希夫染料中的无色品红作用,使无色的亚硫酸品红失去亚硫酸,重新排列,恢复品红对醌结构,显示紫红色,定位于胞质中糖原所在部位。

实验过程

准备材料

实验器材有骨髓涂片或外周血涂片、染色缸、水浴箱、显微镜等;实验试剂有10g/L高碘酸溶液、希夫(Schiff)染液、偏二亚硫酸溶液(新鲜配制)、20g/L甲绿溶液。

实验方法

1、取新鲜干燥的骨髓涂片或外周血涂片,用95%乙醇固定10min,待干。

2、滴加10g/L高碘酸溶液,覆盖整个涂片15~20min,蒸馏水冲洗,待干。

3、涂片置希夫染液中37℃(或室温)放置20min。

4、用亚硫酸溶液冲洗3次(此步亦可省略),再用流水冲洗2~3min,待干。

5、20g/L甲绿溶液复染10~20min。

6、水洗,待干,镜检。

7、结果判断:细胞胞质中出现红色弥散状、颗粒状或块状物质为阳性。胞质无红色或无红色颗粒为阴性,如下图所示。

8、根据反应情况的不同,计数100个同一类细胞,计算出阳性率和积分。

判断标准

中性粒细胞糖原染色结果判断标准

淋巴细胞糖原染色结果判断标准

幼红细胞糖原染色结果判断标准

巨核细胞糖原染色结果判断标准

注意事项

参考范围

现实应用

糖原染色主要应用于:(1)糖尿病的诊断及研究;(2)某些肿瘤的诊断及鉴别,如卵巢无性细胞瘤睾丸精原细胞瘤、骨尤文肉瘤等;(3)糖原贮积症的诊断及研究;(4)心机病变及其他心血管疾病的诊断及研究;(5)证明与区分细胞内空泡变性等。

临床意义

红血病、红白血病及贫血类型的鉴别

红血病、红白血病的幼红细胞呈强阳性反应,积分明显增高;缺铁性贫血(irondeficiencyanemia,IDA)、重型海洋性贫血及骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndromeMD)时,PAS积分亦可增高:溶血性贫血(hemolyticanemia,HA)、淋巴瘤的幼红细胞呈阴性反应或弱阳性反应;再生不良性贫血妊娠合并再生障碍性贫血,AA)、巨幼细胞性贫血(megaloblasticanemia,MA)时幼红细胞呈阴性反应。PAS染色对于红细胞系统疾病的诊断和鉴别诊断有一定价值。但恶性增生的红细胞并不都呈阳性反应,而良性增生的红细胞也并不都呈阴性反应,因此诊断时应结合其他临床资料综合分析。

急性白血病细胞类型的鉴别

PAS染色可用于辅助鉴别急性白血病的细胞类型:①急性淋巴性白血病原始、幼稚淋巴细胞PAS染色呈阴性或阳性反应,阳性反应物多为红色粗颗粒状或块状,围绕核周呈环形排列,胞质底色一般无红色;②急性粒细胞白血病原始粒细胞呈阴性反应或胞质呈淡红色弥漫分布;③急性单核细胞白血病原始和幼稚单核细胞呈阴性或阳性反应,存在弥漫分布的红色细颗粒,胞质边缘及伪足处颗粒较粗大,可见红色小珠或裙边样反应;M4E0异常嗜酸性粒细胞PAS染色可见深粉红色小珠;④急性髓细胞白血病M。型PAS染色呈阳性反应,表现为细颗粒、中粗颗粒散在分布,有时可见红色小珠;红白血病的有核红细胞PAS染色多呈阳性反应,且阳性率高,成熟红细胞可呈阳性反应,其他类型急、慢性白血病的有核红细胞PAS染色多呈阴性反应;巨核细胞白血病原始巨核细胞PAS染色呈颗粒状阳性,部分细胞可见小珠状或块状,小巨核细胞PAS染色可见弥散状分布的细小红色颗粒,边缘处为粗颗粒及小珠;嗜碱性粒细胞白血病的嗜碱性粒细胞PAS染色呈强阳性反应,呈粗颗粒、珠状、块状,有时可与幼稚淋巴细胞PAS染色的阳性反应类似,应注意鉴别;浆细胞PAS染色呈弱阳性反应,可见淡粉红色细小颗粒,极少数可见粗颗粒和小珠;Auer小体PAS染色呈阳性反应。

其他类型细胞的鉴别

PAS染色可用于其他类型细胞的鉴别:①戈谢细胞和尼曼-匹克细胞:戈谢细胞PAS染色呈强阳性反应;尼曼-匹克细胞呈阴性或弱阳性反应,空泡中心呈阴性。②非霍奇金淋巴瘤细胞呈阳性反应,可见粗颗粒散在分布;Reed-Sternberg细胞PAS染色则呈弱阳性或阴性反应。③骨髓转移的腺癌细胞呈强阳性反应,可见红色颗粒或块状,肥大细胞呈强阳性反应,红色细颗粒弥散分布,部分细胞可见大而粗的红色颗粒。

参考资料

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