更新时间：2024-09-20 21:40
外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。注意这里是 mononuclear cell 单个核细胞，而不是 Monocyte 单核细胞。目前外周血单个核细胞主要的分离方法是Ficoll-hypaque（聚蔗糖泛影葡胺）密度梯度离心法。
单个核细胞是血液白细胞中具有单个核细胞的一个含糊术语。以淋巴细胞为主，也包括少数单核细胞、浆细胞等。外周血中单个核细胞的相对密度在1.076-1.090之间，常用相对密度1.077±0.001聚蔗糖-泛影葡胺作密度梯度离心加以分离。
淋巴细胞来源于造血干细胞(hemopoietic stem cell，HSC)。造血干细胞可分化成多能前体细胞( multipotent progenitor cell，MPC)，继而分化为淋巴样干细胞和髓样干细胞。淋巴样干细胞可继续发育为成熟的T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞等。骨髓、胸腺造血微环境是造血干细胞分化发育的主要场所。
一、基本原理
外周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，其比重为1.070左右，而红细胞和多核白细胞的比重超过1.080。这样利用介于两者比重之间的溶液(称为分层液)做密度梯度离心，就可得到单个核细胞。最常用的分层液为聚蔗糖和泛影酸钠混合比重为1.070±0.001的溶液，国内常用泛影葡胺代替泛影酸钠。
二、试剂与器材
1、聚蔗糖—泛影葡胺分层液，Hank’s液，RPMI-1640培养液，肝素。
2、水平离心机。
三、操作步骤
1、取外周静脉血，用肝素抗凝，加等量的Hank’s液并混匀。
2、将分层液加入试管中，用量约为血量的1/2。用吸管沿管壁缓缓将血加入分层液面上。
3、置于水平离心机离心，1500r/min，10min。可见绝大多数单个核细胞悬浮于血浆和分层液的界面，呈白膜状。
4、用尖吸管吸取界面的细胞层，置于另一试管中，加入适量的Hank's液，混匀后以1000r/min，离心10min，弃上清。
5、同法洗涤细胞2次。
6、将细胞重悬于RPMI-1640培养液中，4℃保存备用。
四、注意事项
1、在分离外周血单个核细胞过程中，将稀释血液加于分层液上时，要避免冲散分层液面，而要使之形成良好的界面，否则影响分离结果。
2、此法操作得当，单个核细胞得率可达80%-90%，影响得率最重要的因素是分层液的比重。
因为血液中各有形成分的比重存在差异，因此得以分离。红细胞和粒细胞密度大于分层液，同时因红细胞遇到Ficoll而凝集成串钱状而沉积于管底。血小板则因密度小而悬浮于血浆中，唯有与分层液密度相当的单个核细胞密集在血浆层和分层液的界面中，呈白膜状，吸取该层细胞递经洗涤离心重悬。本法分离单个核细胞纯度可达95%，淋巴细胞约占90%～95%，细胞获得率可达80%以上，其高低与室温有关，超过25℃时会影响细胞获得率。
周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其他细胞不同，红细胞和多核白细胞的比重在1.092左右，单个核细胞的比重为1.075-1.090，血小板为1.030-1.035。因此利用一种介于1.075-1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，可将各种血细胞与单个核细胞分离。